Glutathione Beads可以一步纯化各种表达系统表达的谷胱甘肽-S-转移酶、谷胱甘肽依赖性蛋白和谷胱甘肽转移酶的重组衍生物。Glutathione Beads是以4%琼脂糖凝胶为基质，通过12个原子的间隔臂，用化学方法共价结合了还原型谷胱甘肽制作而成。这种特别设计使树脂的纯化效率得到了提高，因此树脂载量大于20mg GST融合蛋白。Glutathione Beads具有载量高、特异性好、性价比高的特点。

表1. Glutathione Beads产品性能

项目	性能
基质	4%琼脂糖凝胶
配体	通过12原子间隔臂偶联的谷胱甘肽
载量（/ml基质）	>20 mg GST蛋白(40 kDa)
微球粒径（μm）	45–165
最大压力	0.1 MPa, 1 bar
pH稳定范围	3-12
储存缓冲液	含20%乙醇的1XPBS
储存温度	2°C-8°C

2. 问题及解决方案

问题	原因分析	推荐解决方案
柱子反压过高	填料被堵塞	按照第3部分进行树脂清洗。
	填料被堵塞	裂解液中含有微小的固体颗粒，建议上柱前使用滤膜 (0.22μm或0.45μm) 过滤，或者离心去除。
	样品太粘稠	样品中含有高浓度的核酸，加长破碎时间直至粘度降低，或者添加DNase I （终浓度5 μg/ml），Mg2+（终浓度 1 mM），冰上孵育10-15分钟。
	缓冲液太粘稠	有机溶剂或者蛋白稳定试剂（如甘油等）可能会引起反压增高，降低操作流速。
洗脱组分中没有目的蛋白	GST标签蛋白变性了	使用温和的裂解条件，实验条件以经验为准。
	过度的裂解使目的蛋白变性	使用温和的裂解条件，实验条件以经验为准。
	目的蛋白聚集产生了沉淀	在细胞裂解前溶液中加入DTT，终浓度为 1–20 mM。
	融合蛋白改变了GST的构象，影响了目的蛋白的结合力	测定pGEX 中GST的结合力，对载体进行超声处理，检测其结合力。如果载体中GST有很高的亲和力，有可能改变融合蛋白的构象从而降低了GST标签蛋白的亲和力。
	融合蛋白改变了GST的构象，影响了目的蛋白的结合力	降低结合温度至+4°C，充分地清洗。
	柱子平衡时间太短，目的蛋白不是在pH6.5-pH8范围内结合的	用 pH 6.5 –pH 8.0的Buffer进行充分的平衡 (例如PBS) 。
目的蛋白没有完全洗脱下来	洗脱体积太少	增加洗脱液体积，减小洗脱流速。
	洗脱液中谷胱甘肽浓度太低	增加洗脱液中谷胱甘肽浓度，可尝试用50 mM Tris-HCl, 20–40 mM还原型谷胱甘肽, pH 8.0洗脱。
	低pH影响洗脱	在不增加洗脱液中的谷胱甘肽量时，提高洗脱液中pH至pH 8–9 会有改善。
	低pH影响洗脱	增加洗脱液中离子强度，如0.1–0.2 M NaCl。
	洗脱液中的谷胱甘肽被氧化	使用新鲜配制的洗脱液。
	洗脱液中的谷胱甘肽被氧化	加入 DTT。
	非特异性疏水作用影响目的蛋白的溶解与洗脱	洗脱液中加入非离子型洗涤剂，如0.1%的Triton X-100 或者2%正辛基-β-D-吡喃葡糖苷Tween-20。
电泳或western blot检测中发现多条带	Mr 70 000 蛋白与目的蛋白一起被纯化出来	Mr 70 000的蛋白有可能是大肠杆菌基因dnaK 的产物，可以通过在目的蛋白中加入50 mM Tris-HCl, 2 mM ATP, 10 mM MgSO4, pH 7.4在37°C加热10 分钟去除。
	Mr 70 000 蛋白与目的蛋白一起被纯化出来	可以通过ATP-琼脂糖胶或离子交换来去除目的蛋白溶液中的DnaK 蛋白。
	GST融合蛋白已经发生降解	在裂解液中加入蛋白酶抑制剂，如加入1 mM PMSF。
	GST融合蛋白已经发生降解	有可能是蛋白酶对目的蛋白部分降解造成的，可以使用蛋白酶缺陷型宿主菌(如lon-或ompT)。
	细胞破碎过度	减少细胞破碎时间，超声前加入溶菌酶(菌液体积的0.1 倍的 10 mg/ml溶菌酶，25 mM Tris-HCl, pH 8.0)，避免发泡导致蛋白变性，过度超声破碎增加宿主内源蛋白与GST融合目的蛋白的共纯化。
	共价共纯化	包括促进蛋白正确折叠的分子伴侣的共纯化，如：DnaK (Mr ~ 70 000)， DnaJ (Mr ~ 37 000)， GrpE (Mr ~ 40 000)，GroEL (Mr ~ 57 000) 和 GroES (Mr ~10 000)。可再进行一次纯化可以改善。
	抗体与E. coli 的各种蛋白反应	抗体吸附E. coli蛋白：GST-抗体。超声处理去除GST抗体，可以用Western Blots 检测。

3.订购信息及相关产品

名称	货号	规格
Glutathione Beads	SA008010	10mL
	SA008025	25mL
	SA008100	100mL
	SA008C	1L
GSTPur Glutathione Kit	SA008K	3次
GSTPur Glutathione Kit	SA008K05	5次
Glutathione Beads 4FF	SA010010	10mL
	SA010050	50mL
	SA010100	100mL
	SA010500	500mL
	SA010C	1L
GSTCap 4FF	SA010C11	1X1mL
	SA010C51	5x1mL
	SA010C15	1X5mL
	SA010C55	5X5mL
	SA010CS	3X1mL+1X5mL

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