Flag标签是一个由八个亲水氨基酸组成的多肽片段，定位在融合蛋白表面，因此更易与抗体结合以及被肠激酶分解。Anti-DYKDDDDK Affinity Beads是以抗flag(DYKDDDDK)抗体为亲和配体，一步纯化原核、酵母或哺乳动物细胞表达的flag标签融合蛋白。Anti-DYKDDDDK Affinity Beads以4%琼脂糖凝胶为基质，杂蛋白非特异性结合少，可用于flag标签融合蛋白的纯化和免疫沉淀（IP）。

表1. Anti-DYKDDDDK Affinity Beads产品性能

指标	性能
基质	4%琼脂糖微球
配体	Anti-flag鼠单克隆抗体
载量	>1mgDYKDDDDK标签蛋白/ml 介质
粒径 (μm)	45-165
最大流速	0.1 MPa, 1 bar
储存缓冲液	0.02%叠氮化钠，1XPBS
储存温度	2°C - 8°C

2．试剂兼容性

表2、Anti-DYKDDDDK Affinity Beads试剂兼容性

试剂名称	最大耐受浓度	备注
β-巯基乙醇	10mM	纯化过程中应避免使用，如果在IP中使用，填料不能回收重复利用。
DTT	80mM
SDS	--
EDTA	5mM	过高的EDTA会降低蛋白回收率。
Tween-20	5%	过高浓度会影响标签蛋白结合效率。
Triton X-100	5%
NP-40	4%
盐酸胍	0.3M	过高浓度会使抗体变性。
尿素	1.5M	过高浓度会使抗体变性。
甘油	20%	过高浓度会影响标签蛋白结合。
氯化钠	1M	减少非特异性吸附

3. 问题及解决方案

问题	原因分析	推荐解决方案
流穿中有目的蛋白	填料过载	减少上样体积或增加填料体积。
	结合时间太短	延长样品和填料的结合时间。
	标签未暴露	可以加入低浓度的变性剂，上样前透析。
	溶液中试剂不兼容	样品上样前进行透析。
洗脱组分中没有目的蛋白	目的蛋白不稳定	使用新配制的样品。低温操作。细胞裂解液中加入蛋白酶抑制剂。
	样品中无标签融合蛋白	纯化前Western检测是否有flag标签融合蛋白
	目的蛋白表达量太低	优化蛋白表达量。增加上样量。减少NaCl浓度。
背景太杂	非特异性吸附	减少上样量
背景太杂	洗杂不充分	增加洗杂次数，每次清洗孵育5-10min。增加洗杂液中盐离子浓度。

4.订购信息及相关产品

名称	货号	规格
Anti-DYKDDDDK Affinity Beads	SA042001	1ml
Anti-DYKDDDDK Affinity Beads	SA042005	5ml
Anti-HA Affinity Beads	SA068001	1ml
Anti-HA Affinity Beads	SA068005	5ml
Anti-GFP Affinity Beads 4FF	SA070001	1ml
Anti-GFP Affinity Beads 4FF	SA070005	5ml
Anti-c-Myc Affinity Beads	SA065001	1ml
Anti-c-Myc Affinity Beads	SA065005	5ml
Anti-RFP Affinity Beads 4FF	SA072001	1ml
Anti-RFP Affinity Beads 4FF	SA072005	5ml

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