1. 产品介绍
GFP(绿色荧光蛋白)或其突变体EGFP(增强型绿色荧光蛋白)被广泛应用于检测基因表达效率以及目的蛋白的表达和分布。GFP作为标签蛋白，其融合目的蛋白自发荧光,不需要目的基因的抗体或杂交就能知道目的基因在细胞中的定位，其他物质干扰小。Anti-GFP Affinity Beads 4FF可以检测和纯化GFP、EGFP及其融合表达蛋白，不结合BFP标签蛋白。
表1. Anti-GFP Affinity Beads 4FF产品性能
指标 | 性能 |
基质 | 高度交联的4%琼脂糖微球 |
配体 | Anti-GFP Antibody |
载量 | >1mg GFP标签蛋白/ml 介质 |
粒径 (μm) | 45-165 |
最大流速 | 0.3 MPa, 3 bar |
试剂耐受 | Stable up to 80°C, 1mM DTT, 3M Guanidinium•HCl, 8M Urea, 2M NaCl, 2% Nonidet P40 Substitute, 1% SDS, 1% Triton X-100 |
储存缓冲液 | 20%乙醇 |
储存温度 | 2°C - 8°C |
2.问题及解决方案
问题 | 原因分析 | 推荐解决方案 |
流穿中有目的蛋白 | 填料过载 | 减少上样体积或增加填料体积。 |
结合时间太短 | 延长样品和填料的结合时间。 | |
标签未暴露 | 可以加入低浓度的变性剂，上样前透析。 | |
溶液中试剂不兼容 | 样品上样前进行透析。 | |
洗脱组分中没有目的蛋白 | 目的蛋白不稳定 | 使用新配制的样品。 低温操作。 细胞裂解液中加入蛋白酶抑制剂。 |
样品中无标签融合蛋白 | 纯化前Western检测是否有GFP标签融合蛋白 | |
目的蛋白表达量太低 | 优化蛋白表达量。 增加上样量。 减少NaCl浓度。
| |
背景太杂 | 非特异性吸附 | 减少上样量，增加盐浓度。 |
洗杂不充分 | 增加洗杂次数，每次清洗孵育5-10min。 增加洗杂液中盐离子浓度。
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3.订购信息及相关产品
名称 | 货号 | 规格 |
Anti-DYKDDDDK Affinity Beads | SA042001 | 1ml |
SA042005 | 5ml | |
Anti-HA Affinity Beads | SA068001 | 1ml |
SA068005 | 5ml | |
Anti-GFP Affinity Beads 4FF | SA070001 | 1ml |
SA070005 | 5ml | |
Anti-c-Myc Affinity Beads | SA065001 | 1ml |
SA065005 | 5ml | |
Anti-RFP Affinity Beads 4FF | SA072001 | 1ml |
SA072005 | 5ml |
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